產品說明

• 二氧甲基轉移酶是一種牛痘病毒來源的甲基轉移酶，能夠以S－腺苷甲硫氨酸（SAM）為甲基供體，在RNA 5'末端緊鄰帽結構的第一個核苷酸的2'-O上添加一個甲基基團，把Cap 0甲基化為Cap 1結構。Cap1結構能增強mRNA的翻譯效率，因此可有助于改善mRNA轉染和顯微注射實驗中mRNA的表達。 另外，此酶只能作用于帶有7－甲基鳥苷帽結構（m7GpppN）的RNA，并不會作用于5'末端為pN、ppN、pppN或GpppN結構的RNA。
• 來源：二氧甲基轉移酶純化自攜帶二氧甲基轉移酶表達載體的BL21大腸桿菌。

產品用途

以Cap0 mRNA為前體，制備具有Cap1結構的mRNA

產品包裝

活性定義

在37℃、pH8.0的條件下， 1小時內使10 nmol的20個核苷酸20nt）帶有7－甲基鳥苷帽結構（m7GpppN）的mRNA甲基化所需要的酶量定義為1個活性單位。

保存體系

• 50%甘油，20 mM Tris-HCl（25℃，pH 8.0）, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100。
• 保存溫度：-20±5℃，或-80℃長期保存。

從Cap0 mRNA制備Cap1 mRNA，參考反應體系（20μl）

一步法生成Cap1 mRNA，參考反應體系（20μl）

37℃孵育1小時。(若RNA小于200nt，可以延長至3小時)

注意事項

1. 所用于實驗的mRNA必須經過純化并用無核酸酶水溶解，溶液中不能含EDTA和鹽。
2. 建議在反應前熱處理mRNA，以去除5'末端的二級結構，若5'端結構復雜，可將熱處理時間延長至10 min。
3. 若已知mRNA 5'末端的結構復雜，可延長反應時間至3小時以提高加帽效率。5'末端二級結構簡單的mRNA，可以不經過熱處理直接進行加帽反應，反應時間和反應體系需要優化以獲得最佳的加帽效率。
4. SAM穩定性較差，需要在反應開始之前現配現用。基于實驗所需用量，在反應開始前將32mMSAM儲備液稀釋成2mM的工作液冰上保存備用。
5. 建議在反應體系中添加RNase抑制劑(終濃度為1U/μl)，防止RNase導致的mRNA降解。