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T7 RNA聚合酶

作者 啟辰生 發布于 2025-04-07
分類:

產品說明

T7 RNA聚合酶,(T7 RNA Polymerase) 是一種高度特異識別T7啟動子序列的DNA依賴的5'→3' RNA聚合酶,以含有T7啟動子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板,NTP為底物,合成與啟動子下游的單鏈DNA或 雙鏈DNA模板鏈互補的RNA。該酶由883個氨基酸組成,分子量為99kDa。

來源:T7 RNA 聚合酶純化自攜帶T7 RNA 聚合酶表達載體的BL21大腸桿菌。


產品用途

  1. 合成單鏈RNA;
  2. 制備放射性標記RNA探針
  3. 合成siRNA前體
  4. 制備用于研究RNA結構、加工和催化的RNA

*使用帽結構類似物,制備帽化RNA

產品包裝

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活性定義

在37℃、pH8.0的條件下,1小時內使1nmol的GMP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位

保存體系

50%甘油,50 mM Tris-HCl,  pH 8.0, 100 mM NaCl, 10 mM DTT, 1 mM EDTA ,0.1% Triton X-100。

保存溫度:-20℃,或-80℃長期保存

參考反應體系(100μl

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混勻后,37℃反應2~3小時。

注意事項 

  1. 在反應體系中可添加 RNase Inhibitor(終濃度為1U/μl),防止 RNase 污染。 
  2. 為了特定區域的有效轉錄,建議在其區域下游把模板DNA預先切成平端或 5′突出末端; 
  3. 緩沖液中的亞精胺與核酸結合可能形成不溶物,建議最后加入模板 DNA; 
  4. 模板DNA質量對合成的mRNA數量和質量非常重要,應為完全線性化、 RNase A-Free、高純度,建議OD260/280為1.8~2.0。
  5. 可在反應體系中添加無機焦磷酸酶(終濃度為4U/ml),以增加mRNA產量。
  6. 隨著保存時間的延長,如果酶活性明顯下降,可能是由于反應緩沖液中DTT的分解。若觀察到mRNA產量下降,可在反應體系中添加DTT至終濃度為10mM。


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